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近日，國(guó)家藥監(jiān)局正式發(fā)布行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《核酸提取試劑盒（磁珠法）》YY/T 1717-2020。此標(biāo)準(zhǔn)對(duì)核酸提取試劑盒（磁珠法）的分類、技術(shù)要求、試驗(yàn)方法等進(jìn)行了相關(guān)規(guī)范，填補(bǔ)了該領(lǐng)域標(biāo)準(zhǔn)空白，對(duì)于分子診斷行業(yè)產(chǎn)品的長(zhǎng)遠(yuǎn)發(fā)展、以及現(xiàn)階段新冠疫情防控有著重要意義。
在分子診斷領(lǐng)域，核酸提取是實(shí)驗(yàn)中最基本、最重要的環(huán)節(jié)，關(guān)系著分子實(shí)驗(yàn)的成敗。磁珠法只是核酸提取方法之一，下面就讓我們來(lái)了解一下核酸提取的原理和各種方法吧～
一
核酸抽提原理
二
核酸提取方法
苯酚和氯仿均為有機(jī)溶劑，其萃取核酸原理是苯酚與氯仿對(duì)于與核酸結(jié)合的蛋白質(zhì)有極強(qiáng)的變性作用，但對(duì)核酸本身沒(méi)有影響。經(jīng)離心后，形成上層水相下層酚/氯仿相，變性后的蛋白質(zhì)溶于酚/氯仿相或者在兩相交界處形成凝膠層，而核酸易溶于水而不溶于有機(jī)溶劑從而留在水相；同時(shí)，氯仿可以有助于有機(jī)相與水相的分離和去除溶于水的部分酚。最后，再將核酸通過(guò)乙醇沉淀即可達(dá)到提取的目的。
此法的缺點(diǎn)是：
蛋白質(zhì)難以徹底去除；
操作難度大且費(fèi)時(shí)；
使用危險(xiǎn)化學(xué)品。
樣本中加入促細(xì)胞裂解的化學(xué)物質(zhì)（SDS、Tween 20等），可加入蛋白酶K消化一段時(shí)間，也可不加，95℃以上加熱10分鐘左右；高速離心，上清中的DNA即可用于PCR擴(kuò)增。該方法操作簡(jiǎn)便，成本低，一般僅用于血清或體液中病原體核酸的提取。
此方法在臨床應(yīng)用廣泛，但缺點(diǎn)是：
核酸純度低，產(chǎn)量低；
提取出的核酸除了PCR外不能直接用于其它分子生物學(xué)操作。
此種方法是利用核酸表面會(huì)覆蓋一層由水分子構(gòu)成的薄膜，在高鹽環(huán)境下，這層親水膜會(huì)遭到破壞從而核酸可被吸附在離心柱上，而其他雜質(zhì)如蛋白質(zhì)、代謝產(chǎn)物等則會(huì)被離心沉淀與核酸分離。最后通過(guò)洗脫，將核酸從吸附膜上脫離，即可得到純化后的核酸。這也是試劑盒提取中廣泛使用的方法。
但即便如此，該方法仍存在缺點(diǎn)：
高度依賴吸附膜的結(jié)合能力；
洗脫不完全導(dǎo)致核酸流失；
無(wú)法大量提取核酸，較難實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化。
攜帶正電荷的磁珠易于吸附負(fù)電荷的核酸，主要用于從人血清或血漿樣品中提取DNA 和RNA（例如從血液樣本中檢測(cè)HIV 或HBV 病毒基因組的樣品制備）。一般而言，將樣品與結(jié)合緩沖液和磁珠混合，核酸與磁珠結(jié)合后，經(jīng)過(guò)數(shù)次洗滌與磁場(chǎng)捕獲，洗脫下來(lái)的核酸即可通過(guò)PCR或其它特定方法來(lái)檢測(cè)特定的DNA或RNA。磁分離法也是廣泛應(yīng)用于診斷行業(yè)，且能實(shí)現(xiàn)高通量、自動(dòng)化的核酸提取方法。
?伯杰醫(yī)療的核酸提取及純化試劑盒，完全符合最新發(fā)布的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，和高效、簡(jiǎn)便地提出高純度的核酸。試劑盒使用了表面修飾的超順磁性納米微球，小粒徑的磁顆粒擁有更大的表面積，高效結(jié)合核酸，這對(duì)能否從大量樣本中成功提取微量的目的分子至關(guān)重要。配套伯杰全自動(dòng)核酸提取儀，使用15min快速提取模式，輕松實(shí)現(xiàn)“急診樣本4小時(shí)出報(bào)告”的最新要求。
●第三期：分析PCR結(jié)果，還在使用自動(dòng)閾值線？
上海伯杰醫(yī)療科技有限公司是一家致力于感染性病原體分子診斷試劑研發(fā)和應(yīng)用，深耕于多重?zé)晒?PCR 診斷試劑和痕量病毒二代測(cè)序試劑及相關(guān)服務(wù)的國(guó)家高新技術(shù)企業(yè)。公司圍繞感染性病原體這一主線，從診斷試劑、診斷儀器、測(cè)序服務(wù)和醫(yī)檢所服務(wù)等多個(gè)面提供全套解決方案。公司秉承“勇于創(chuàng)新，質(zhì)量為先”的方針，為醫(yī)療機(jī)構(gòu)、疾控公衛(wèi)、高?？蒲械群献骰锇樘峁﹥?yōu)質(zhì)產(chǎn)品與服務(wù)。
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