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病原監(jiān)控專(zhuān)題丨susMDCK懸浮細(xì)胞分離流感病毒:與繁重工作說(shuō)拜拜

流感監(jiān)控網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室常用MDCK細(xì)胞系來(lái)進(jìn)行季節(jié)性流感病毒的分離

2022-02-21

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流感監(jiān)控網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室常用MDCK細(xì)胞系來(lái)進(jìn)行季節(jié)性流感病毒的分離,該細(xì)胞系是由Madin和Darby在1958年從美國(guó)Cocker Spaniel母曲架犬的腎臟組織分離培育出的,通常是以貼壁方式生長(zhǎng)的上皮樣細(xì)胞。由于其病毒感染效率高,增值快,且不易變異,MDCK細(xì)胞系廣泛應(yīng)用于多種病毒的分離培養(yǎng),常被用于疫苗生產(chǎn)。

傳統(tǒng)的MDCK細(xì)胞系培養(yǎng),采用有血清的貼壁細(xì)胞培養(yǎng)方式。然而血清成分復(fù)雜,含有對(duì)細(xì)胞有害的成分,后期產(chǎn)物分離純化難度大。另外,血清來(lái)源有限,價(jià)格昂貴,生產(chǎn)成本高;而且血清的質(zhì)量因動(dòng)物個(gè)體、血清產(chǎn)地、生產(chǎn)批號(hào)不同而產(chǎn)生波動(dòng),使得實(shí)驗(yàn)和生產(chǎn)難以實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化。


通過(guò)對(duì)傳統(tǒng)MDCK細(xì)胞的無(wú)血清培養(yǎng)馴化,加上高表達(dá)的表面受體——α-2,6Gal Sa受體蛋白,可以使該細(xì)胞系與流感病毒表面HA基因更好地結(jié)合,達(dá)到高效分離流感病毒的目的。目前,懸浮細(xì)胞分離病毒已廣泛被使用。susMDCK懸浮細(xì)胞生長(zhǎng)不依賴(lài)支持物表面,由于缺乏粘附分子的表達(dá),在培養(yǎng)基中便自然呈現(xiàn)懸浮狀態(tài)。因此在細(xì)胞培養(yǎng)與傳代時(shí),使用無(wú)血清培養(yǎng)液,并且只需要直接稀釋或離心稀釋?zhuān)瑹o(wú)需胰酶消化。相較于傳統(tǒng)MDCK貼壁細(xì)胞具有操作簡(jiǎn)便,分離率高,分離周期短的優(yōu)勢(shì)。


sus-MDCK懸浮細(xì)胞

分離病毒的優(yōu)勢(shì)

操作便捷

細(xì)胞傳代——只需稀釋?zhuān)瑹o(wú)需胰酶消化,且無(wú)需牛血清,使用susMDCK懸浮細(xì)胞專(zhuān)用的M-SUS培養(yǎng)液即可;


標(biāo)本接種——無(wú)需洗滌細(xì)胞,無(wú)病毒吸附過(guò)程,直接加入標(biāo)本培養(yǎng);


病毒收獲和鑒定——隨時(shí)可取出進(jìn)行血凝試驗(yàn),若滴度小于8,則可以繼續(xù)培養(yǎng),直到滴度滿(mǎn)足要求。


效果顯著

懸浮的susMDCK細(xì)胞通過(guò)增加病毒吸附表面積和流感病毒的受體,提高了吸附病毒的能力。對(duì)H1N1pdm09亞型和乙型流感病毒,尤其是對(duì)近年來(lái)因基因位點(diǎn)發(fā)生變異導(dǎo)致很難分離的季節(jié)性H3亞型流感病毒,分離培養(yǎng)的優(yōu)勢(shì)十分顯著(如圖1)。


另外,與貼壁細(xì)胞相比可以顯著提高病毒分離培養(yǎng)的陽(yáng)性率和病毒滴度(如圖2)。


圖1 H3N2懸浮細(xì)胞培養(yǎng)物的血凝實(shí)驗(yàn)結(jié)果


圖2 兩種類(lèi)型細(xì)胞對(duì)隨機(jī)樣本

分離培養(yǎng)陽(yáng)性率的比較


設(shè)備簡(jiǎn)單
只需培養(yǎng)箱、搖床和計(jì)數(shù)儀。



高效分離流感病毒的

susMDCK懸浮細(xì)胞產(chǎn)品


為了更好的服務(wù)于流感病毒分離培養(yǎng)工作,上海伯杰醫(yī)療科技有限公司精心定制了不同的懸浮細(xì)胞產(chǎn)品,以滿(mǎn)足您的全方位需求!


方案一:流感病毒高效細(xì)胞分離培養(yǎng)試劑盒

一套囊括懸浮細(xì)胞培養(yǎng)所需儀器、試劑及耗材的實(shí)驗(yàn)包



方案二:susMDCK懸浮細(xì)胞成品管

無(wú)需試劑耗材,可直接進(jìn)行病毒分離培養(yǎng)。




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我公司構(gòu)建的病毒一代測(cè)序平臺(tái),可開(kāi)展季節(jié)性流感病毒四種亞型及禽流感病毒三種亞型的單個(gè)基因或全基因組一代測(cè)序。其它亞型流感病毒可提供定制測(cè)序服務(wù)。我公司現(xiàn)有illumina二代測(cè)序平臺(tái),可實(shí)現(xiàn)對(duì)所有A型和B型流感病毒的全基因組測(cè)序。


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